蛋白互作： 酵母双杂交一对一互作验证实验问题（更新2024.4）

1、酵母双杂交一对一互作验证实验中请问四缺上阳性不长是出了什么问题？二缺都长了。

答：可以检测一下阳性质粒有没有问题，这种情况一般都是质粒出现了问题     

2、酵母双杂交一对一互作验证实验中如果AD-1/BD-2在四缺上长了，但AD-2/BD-1没长，能说明有互作吗？

              答：这个要结合对照组的结果来看

3、酵母双杂交一对一互作验证实验中请问影印三缺和四缺的作用什么

              答：验证蛋白是否互作

4、我用AD文库和BD载体双杂筛库，做了2次，三缺一个菌都不长，请问可能哪里出问题啦？

               答：需要根据二缺的生长状况来分析

5、筛选3-AT浓度时sd-2的板子不长菌是什么情况，一起做的同一批的都长了？

      答：二缺上不长菌极有可能是AD与BD质粒没有同时转进去，可以再试试，因为加了3-AT后，一般情况下不会影响二缺的生长

6、请问连AD和BD的时候目的基因需要去掉终止密码子吗？

      答：分两种情况：第一种载体是标签在酶切位点5’端，也是最常用的载体，一般不去终止密码子;第二种就是载体的标签在酶切位点3’端就需要去掉密码子。大部分用的是第一种，看情况而定，原则是保留标签能够表达就行了。

7、请问如何保证共转化时一个诱饵只钓到一个猎物？

      答：一般情况下是一个猎物，这个验证很简单，直接做PCR验证，测序就可以

8、质粒浓度大概多少呢？

      答：200ng/uL左右就可以了