GST pull-down与co-IP的区别

GST pull-down与co-IP的区别

GST pull-down原理：把GSH与琼脂糖交联形成GSH琼脂糖珠，就能够将带有GST标签的诱饵蛋白固定，当体系中存在与诱饵蛋白有直接相互作用的靶标蛋白时，它就能够与琼脂糖珠固相复合物结合而被“拉”下来。

co-IP原理：即免疫共沉淀实验，它通过一种偶联有Protein A/G的琼脂糖珠或磁珠（Protein A/G能够特异性结合免疫球蛋白），将诱饵蛋白的抗体固定，随后再通过该抗体固定诱饵蛋白，当与诱饵蛋白有相互作用的靶标蛋白与此固相复合物混合时就可被吸附而“沉淀”下来。

区别：GST pull-down一般用于体外实验，非生理状态下的验证，蛋白质的结构和形式可能与天然状态下存在一定差异，一般用于体外验证两个已知蛋白的直接相互作用。co-IP实验反映的是两个蛋白在体内或细胞水平的相互作用，因为在进行co-IP检测时，样本一般源于非变性裂解细胞，活细胞状态下蛋白质之间的相互作用被保持，所以其反映的是细胞中真实的蛋白互作情况，但是诱饵蛋白和靶标蛋白之间是直接作用还是有其它蛋白介导的间接相互作用无法确定。

综合而言，GST pull-down实验和co-IP实验其实是相互补充的两种实验方法，通过二者结合，我们才能更准确地了解两个蛋白之间的真实互作情况。