蛋白-DNA互作：凝胶阻滞实验　EMSA

▲ 凝胶阻滞实验（EMSA）原理示意图

  凝胶阻滞（Electrophoretic mobility shift assay, EMSA）实验是体外分析DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。其原理为蛋白质与核酸分子结合后将大大增加其相对分子质量，而凝胶电泳中核酸的迁移率与其相对分子质量成正比，因此没有结合蛋白质的核酸片段跑得快，而与蛋白质结合形成复合物的核酸则跑得慢。

▲ 凝胶阻滞实验（EMSA）流程图

  凝胶阻滞（Electrophoretic mobility shift assay, EMSA）实验是体外分析DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。其原理为蛋白质与核酸分子结合后将大大增加其相对分子质量，而凝胶电泳中核酸的迁移率与其相对分子质量成正比，因此没有结合蛋白质的核酸片段跑得快，而与蛋白质结合形成复合物的核酸则跑得慢。

  ①构建表达载体：目的基因克隆或目的基因合成；限制性内切酶酶切骨架载体并纯化；目的基因插入骨架载体；转化大肠杆菌，筛选阳性克隆并测序鉴定；
  ②转化表达菌株：将目的表达载体转化表达菌株；
  ③制备目的蛋白：诱导目的蛋白表达并提取纯化目的蛋白；
  ④进行凝胶阻滞（EMSA）实验；
  ⑤拍照记录实验结果。

  1、转录因子与启动子区域的结合验证
  2、蛋白-核酸复合体的形成
  凝胶阻滞技术服务优势：
  ①团队经验丰富；
  ②提供原始图片，保证数据真实可靠。