蛋白互作：荧光素酶互补成像技术 LCI

▲ 荧光素酶互补成像技术（LCI）原理示意图

  萤火虫荧光素酶片段互补成像技术（LCI）是近年来形成的研究蛋白互作的新技术，把2个目标蛋白分别连接于萤火虫荧光素酶的C端 （CLuc：398–550 aa)和N端（NLuc：2–416aa）。如果2个蛋白互作，N段和C端接近形成有活性的荧光素酶，荧光素酶分解萤光素底物并产生荧光。
  将LCI技术与烟草瞬时表达技术相结合来研究植物蛋白的相互作用。该技术具有很多优势：1、可以实现活体细胞内实时、定量分析；2、不受植物自发荧光的干扰；3、不需要裂解细胞提取蛋白质，可以很好的反映植物生理条件下蛋白的互作状态。

▲ 荧光素酶互补成像（LCI）实验流程图

  荧光素酶互补成像（LCI）实验流程图

  ①植物表达载体构建（融合蛋白）：目的基因克隆或目的基因合成；限制性内切酶酶切骨架载体并纯化；目的基因插入骨架载体；转化大肠杆菌，筛选阳性克隆并测序鉴定；

  ②转化农杆菌：将目的载体转化到农杆菌菌株内，例如：GV3101；
  ③注射烟草：将含有CLuc与NLuc的农杆菌菌液按照比例混匀，共同注射本氏烟叶片；
  ④定量、定性分析；
  ⑤检测目的蛋白的表达；
  ⑥分析结果并完成交付。

荧光素酶互补成像技术技术服务范畴：验证两个已知蛋白质间的相互作用
荧光素酶互补成像技术技术服务优势：
  ①团队经验丰富；
  ②提供原始图片，保证数据真实可靠；
  ③该技术得到的蛋白互作关系符合体内实际情况，结果可信度高；
  ④可定性、定量分析蛋白互作关系。